指示剂选择

指示剂选择不当，加之肉眼对变色点辨认困难，都会给测定结果带来误差。因此，在多种指示剂中，选择指示剂的依据是:要选择一种变色范围恰好在滴定曲线的突跃范围之内，或者至少要占滴定曲线突跃范围一部分的指示剂。这样当滴定正好在滴定曲线突跃范围之内结束时，其最大误差不过0.1%，这是容量分析容许的。

在实际工作中，肉眼是难以准确地观察出指示剂变色点颜色的微小的改变。人们目测酸碱指示剂从一种颜色变为另一种颜色的过程，只能在一定的pH变化范围内才能发生，即只有当一种颜色相当于另一种颜色浓度的十倍时才能勉强辨认其颜色的变化。在这种颜色变化的同时，介质 的pH值则由一个值变到另一个值。当溶液的pH值大于pKHIn时, [In-]将大于[HIn]且当[In-]/[HIn]=10时，溶液将完全呈现碱色成分的颜色，而酸色被遮盖了，这时溶液的 pH=pKHIn + 1。同理，当溶液的pH值小于pKHIn时, [In-]将小于[HIn]且当[In-]/[HIn]=1/10时，溶液将完全呈现酸色成分的颜色，而碱色被遮盖了，这时溶液的 pH=pKHIn - 1。

可见溶液的颜色是在从pH=pKHIn - 1到 pH=pKHIn + 1的范围内变化的，这个范围称为指示剂的变色范围即变色域。在变色范围内，当溶液的pH值改变时，碱色成分和酸色成分的比值随之改变，指示剂的颜色也发生改变。超出这个范围，如pH≥pKHIn + 1时，看到的只是碱色;而在pH≤pKHIn - 1时，则看到的只是酸色。因此指示剂的变色范围约2个pH单位。由于人的视觉对各种颜色的敏感程度不同，加上在变色域内指示剂呈现混合色，两种颜色互相影响观察，所以实际观察结果与理论值有差别，大多数指示剂的变色范围小于2个PH单位。

1、酸碱指示剂。指示溶液中H+浓度的变化，是一种有机弱酸或有机弱碱，其酸性和碱性具有不同的颜色。指示剂酸HIn在溶液中的离解常数Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的颜色决定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又决定于[H+]。以甲基橙(Ka=10-3.4)为例，溶液的pH<3.1时，呈酸性，具红色;pH>4.4时，呈碱性，具黄色;而在pH3.1~4.4，则出现红黄的混合色橙色，称之为指示剂的变色范围。不同的酸碱指示剂有不同的变色范围。

2、金属指示剂。络合滴定法所用的指示剂，大多是染料，它在一定pH下能与金属离子络合呈现一种与游离指示剂完全不同的颜色而指示终点。

3、氧化还原指示剂。为氧化剂或还原剂，它的氧化形与还原形具有不同的颜色，在滴定中被氧化(或还原)时，即变色，指示出溶液电位的变化。

4、沉淀滴定指示剂。主要是Ag+与卤素离子的滴定，以铬酸钾、铁铵矾或荧光黄作指示剂。

化学试剂中的一类。在一定介质条件下，其颜色能发生变化 、能产生混浊或沉淀，以及有荧光现象等。常用它检验溶液的酸碱性;滴定分析中用来指示滴定终点;环境检测中检验有害物。一般分为酸碱指示剂、氧化还原指示剂、金属指示剂、吸附指示剂等。

用以指示滴定终点的试剂。在各类滴定过程中，随着滴定剂的加入，被滴定物质和滴定剂的浓度都在不断变化，在等当点附近，离子浓度会发生较大变化，能够对这种离子浓度变化作出显示(如改变溶液颜色，生成沉淀等)的试剂就叫指示剂。如果滴定剂或被滴定物质是有色的，它们本身就具有指示剂的作用，如高锰酸钾。

双色指示剂的变色范围不受其用量的影响，但因指示剂本身就是酸或碱，指示剂的变色要消耗一定的滴定剂，从而增大测定的误差。对于单色指示剂而言，用量过多，会使用变色范围向pH值减小的方向发生移动，也会增大滴定的误差。例如:用0.1mol/LnaOH滴定0.1mol/LHAc,pHsp=8.5,突跃范围为pH8.70-9.00,滴定体积若为50ml,滴入2-3滴酚酞，大约在pH=9时出现红色;若滴入10-15滴酚酞，则在pH=8时出现红色。显然后者的滴定误差要大得多。

指示剂用量过多，还会影响变色的敏锐性。例如:以甲基橙为指示剂，用HCl滴定NaOH溶液，终点为橙色，若甲基橙用量过多则终点敏锐性就较差。

酸碱指示剂

化学式:C20H14O4

酚酞为白色或微带黄色的细小晶体。熔点258-262℃，相对密度1.27。溶于乙醇(难溶于水而易溶于酒精。因此通常把酚酞配制成酒精溶液使用)，溶于稀碱溶液呈深红色，溶于酸性溶液颜色不发生变化,微溶于醚，不溶于水，无臭，无味。由邻苯二甲酸酐和苯酚在加入脱水剂的条件下加热至115-120℃进行缩合制得。

中文名称:钙指示剂;酸性媒介黑R;铬蓝黑R;依来铬蓝黑R;酸性铬蓝黑R;铬蓝黑 R;酸性媒介黑 R;酸性铬蓝黑 R

英文名称:Acid mordant black R; Eriochrome blue black R; 1-Naphthalenesulfonic acid, 3-hydroxy-4-[(2-hydroxy-1-naphthalenyl)azo]-, monosodium salt; C.I. Mordant black 17; 3-hydroxy-4-[(2-hydroxy-1-naphthalenyl)azo]-1-naphthalenesulfonic aci monos; 3-hydroxy-4-(2-hydroxy-1-naphthylazo)-1-naphthalenesulfonic acid, sodium salt;calcon-carboxylic acid

CAS:2538-85-4

分子式:C20H14N2NaO5S

分子质量:416.37

CAS: 493-52-7

分子式: C15H15N3O2

分子量: 269.31

熔点: 179-182℃

中文名称: 甲基红

性质描述: 有光泽的紫色结晶或红棕色粉末。熔点180-182℃。易溶于乙醇、冰醋酸，几乎不溶于水。

生产方法: 由邻氨基苯甲酸重氮化后，与N，N-二甲基苯胺反应而得。

用途: 甲基红是常用的酸碱指示剂之一，常浓度为0.1%乙醇溶液，pH4.4(红)-6.2(黄)。也用于原生动物活体染色。

1、从红萝卜皮中提取酸碱指示剂 刮下红萝卜的红皮后，用95%的酒精浸泡一天左右，过滤取出它的滤液即酸碱指示剂。按检验的需要制作pH1-14的标准液若干个，每个标准液取10ml分置于试管中，再分别加入红萝卜皮浸泡液10滴，塞紧作为比色样品。在某待测溶液中加入红萝卜浸泡液，颜色发生变化后再与比色样品比较，就能确定待测溶液pH值的大致范围。

2、从紫草中提取酸碱指示剂 取紫草5g，用50%的酒精浸泡一天可得到紫草素的紫色的酒精溶液即酸碱指示剂。其遇到酸碱的变色与石蕊试液相同。

3、从紫色卷心菜中提取酸碱指示剂 取约250g紫色卷心菜，洗净切碎置于不锈钢锅中加水煮沸10分钟，然后过滤冷却置于容器中即可用作酸碱指示剂。其用法可参照上述操作1的方法。

4、从米苋菜中提取酸碱指示剂，其操作方法同操作3。

5、用咖喱粉制酸碱指示剂。

糖萝卜、蓝莓胡萝卜、樱桃咖哩粉、飞燕草花瓣、天竺葵花瓣、葡萄七叶树的 叶、绣球花、洋葱牵牛花花瓣、欧洲樱草罂粟花瓣、紫牡丹、红叶卷心菜、红萝卜、大黄玫瑰花瓣、草莓茶百里香、姜黄郁金香花瓣、紫萝兰花瓣、紫色高丽菜汁等。

生物指示剂是一类特殊的活微生物制品,可用于确认灭菌设备的性能,灭菌程序的验证,生产过程灭菌效果的监控等.

定义

对特定灭菌处理有确定的抗力，并装在内层包装中可供使用的染菌载体。用于确认灭菌设备的性能,灭菌程序的验证,生产过程灭菌效果的监控等。

分类

1、按结构分可分为片状生物指示剂(strip biological indicator)和自含式生物指示剂(self-contained biological indicator);

2、按监测灭菌工艺可分为环氧乙烷灭菌生物指示剂，湿热灭菌生物指示剂，辐照灭菌生物指示剂，干热灭菌生物指示剂，过氧化氢灭菌生物指示剂等;

3、按培养时间可分为通用型生物指示剂和快速型生物指示剂。

重量质量特性

1、芽孢含量

2、D值

作用

1、 对任何灭菌设备性能，灭菌工艺效果的验证，可通过得到 的物理参数如热分布与热穿透数据, 来估测一个灭菌程序对微生物的致死性。但物理参数并不能直观反映微生物的杀灭程度，保证是否达到规定的"无菌保证水平(Sterility Assurance Level, SAL)(SAL的定义为产品经灭菌/除菌后微生物残存的概率，国际上一致规定SAL不得大于10)"。生物指示剂就是为了保证整个灭菌过程达到SAL 水平而应用的,它能综合反映影响灭菌效果的各种因素。

2、 无菌检查是无菌产品质量控制的一个重要指标。但无菌检查是抽样检查，而微生物污染属非均匀污染，由于抽样的概率问题，生产过程中产品灭菌效果不符合要求往往难以用无菌检查结果反映出来，除非是较严重污染的情况。因此，无菌产品的无菌保证不能依据终产品的无菌检查结果，而需要通过生物指示剂的挑战试验来监控。

指示剂与指示液的配制

二苯胺磺酸钠指示液取二苯胺磺酸钠0.2g，加水100ml使溶解，即得。

二苯偕肼指示液 取二苯偕肼1g，加乙醇100ml使溶解，即得。

双硫腙指示液 取双硫腙50mg，加乙醇100ml使溶解，即得。

石蕊指示液 取石蕊粉末10g,加乙醇40ml，回流煮沸1小时,静置，倾去上层清液，再用同一方法处理二次，每次用乙醇30ml，残渣用水10ml洗涤，倾去洗液，再加水50ml，煮沸，放冷，滤过，即得。变色范围 pH4.5~8.0(红→蓝)。

甲酚红指示液 取甲酚红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液5.3ml使溶解，再加水稀释至100ml，即得。变色范围 pH7.2~8.8(黄→红)

甲酚红-麝香草酚蓝混合指示液取甲酚红指示液1份与0.1%麝香草酚蓝溶液3份,混合，即得。

甲基红指示液取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围 pH4.2~6.3(红→黄)。

甲基红-亚甲蓝混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2%亚甲蓝溶液8ml，摇匀，即得。

甲基红-溴甲酚绿混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30ml，摇匀，即得。

甲基橙指示液取甲基橙0.1g，加水100ml使溶解，即得。 变色范围 pH3.2~4.4(红→黄)。

甲基橙-二甲苯蓝FF混合指示液 取甲基橙与二甲苯蓝FF各0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。

邻二氮菲指示液取硫酸亚铁0.5g，加水100ml使溶解,加硫酸2滴与邻二氮菲0.5g,摇匀，即得。本液应临用新制。

茜素磺酸钠指示液取茜素磺酸钠0.1g，加水100ml使溶解，即得。变色范围 pH3.7~5.2(黄→紫)

荧光黄指示液取荧光黄0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。

钙黄绿素指示剂 取钙黄绿素0.1g，加氯化钾10g，研磨均匀，即得。

钙紫红素指示剂取钙紫红素0.1g，加无水硫酸钠10g,研磨均匀，即得。

姜黄指示液取姜黄粉末20g，用冷水浸渍4次，每次100ml,除去水溶性物质后，残渣在100℃干燥，加乙醇100ml，浸渍数日，滤过，即得。

结晶紫指示液取结晶紫0.5g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。

酚酞指示液取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得。 变色范围 pH8.3~10.0(无色→红)。

铬黑T指示剂取铬黑T 0.1g，加氯化钠10g，研磨均匀，即得。

淀粉指示液取可溶性淀粉0.5g，加水5ml搅匀后，缓缓倾入100ml沸水中，随加随搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液，即得。本液应临用新制。

硫酸铁铵指示液取硫酸铁铵8g，加水100ml使溶解，即得。

溴酚蓝指示液取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围 pH2.8~4.6(黄→蓝绿)。

溴麝香草酚蓝指示液取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围 pH6.0~7.6(黄→蓝)。

麝香草酚酞指示液取麝香草酚酞0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。变色范围 pH9.3~10.5(无色→蓝)。

麝香草酚蓝指示液取麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液4.3ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围 pH1.2~2.8(红→黄);pH8.0~9.6(黄→紫蓝)。