显微光学切片断层成像系统

国家重大科学仪器设备开发专项"显微光学切片断层成像仪器研发与应用示范"年度研讨会,在华中科技大学举行。该校正着手研发高分辨全脑神经元网络可视化仪器,该技术将为揭示大脑奥秘作出重要贡献。

显微光学切片断层成像系统基本信息

中文名称 显微光学切片断层成像系统 外文名称 MOST
出    处 华中科技大学 人    物 骆清铭

显微光学切片断层成像系统(MOST)相对于传统成像技术优势明显,创造出迄今为止最精细的小鼠全脑神经元三维连接图谱,为实现全脑网络可视化创造了必要条件。该成果将在脑结构、脑功能、脑疾病以及药物作用效果等研究中,发挥非常重要的作用。

通过该系统解密大脑结构,使治愈多种神经性疾病成为可能。下一步,研究团队有望在荧光成像、快速成像、多尺度成像和活体功能成像等方面取得突破,并有望在不久的将来,实现人类在单个细胞水平可视化完整人脑网络的梦想。

显微光学切片断层成像系统造价信息

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显微光学切片断层成像系统简介

国家重大科学仪器设备开发专项“显微光学切片断层成像仪器研发与应用示范”年度研讨会,在华中科技大学举行。该校正着手研发高分辨全脑神经元网络可视化仪器,该技术将为揭示大脑奥秘作出重要贡献。

显微光学切片断层成像系统(MOST)由华中科技大学教授骆清铭领导的团队,经过8年攻关完成,在国际上率先建立了可对厘米大小样本进行突起水平精细结构三维成像。该系统具有自主知识产权的并于2010年在《科学》杂志发表,并入选“2011年度中国十大科学进展”。

显微光学切片断层成像系统常见问题

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显微光学切片断层成像系统文献

光学相干断层成像在围支架置入期的应用 光学相干断层成像在围支架置入期的应用

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近年来光学相干断层成像在冠心病的研究中应用日益广泛,尤其在围支架置入期发挥了重要的作用。支架置入术前可评估斑块的特点,术后即刻评估支架的贴壁、组织损伤等,长期随访中评估血栓事件、新生内膜增生以及支架内新生斑块等。同时,光学相干断层成像在药物疗效评估及新型支架的研发中显示出其独特的优势。

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光纤束共焦显微成像 光纤束共焦显微成像

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在光纤共焦显微系统理论的基础上,结合普通并行共焦理论和抽样定理,研究光纤束共焦系统的有效点扩散函数,得出光纤束共焦系统的光场分布情况。根据光纤束共焦系统的有效点扩散函数和光纤束中光纤的排列特点,分析光纤束共焦显微系统成象质量的影响因素。结果表明光纤束的光纤间距与物镜的放大率决定了系统的横向分辨率。

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通过逐点、逐行、逐面快速扫描成像,并通过数据线连接到计算机上进行图像分析。由显微镜摄像头 图像分析软件组合而成的系统,一般被称为显微影像软件、显微镜照相系统、显微摄像系统等。一般购买显微镜摄像头时都会带有图像分析软件,所以人们很容易和混绕,误以为显微镜成像系统等于显微镜摄像头。

X射线断层成像

X射线断层成像(Computerized Tomography,简称CT),是一种影像诊断学的检查。这一技术曾被称为电脑轴切面断层影像(Computed Axial Tomography)。

X射线断层成像是一种利用数位几何处理后重建的三维放射线医学影像。该技术主要通过单一轴面的X射线旋转照射人体,由于不同的组织对X射线的吸收不同,可以用电脑的三维技术重建出断层面影像。经由窗宽、窗位处理,可以得到相应组织的断层影像。将断层影像层层堆叠,即可形成立体影像。

X射线断层成像是一种利用数位几何处理后重建的三维放射线医学影像。该技术主要通过单一轴面的X射线旋转照射人体,由於不同的生物组织对X射线的吸收力(或称阻射率Radiodensity)不同,可以用电脑的三维技术重建出断层面影像,经由窗值、窗位处理,可以得到相对的灰阶影像,如果将影像用电脑软体堆叠,即可形成立体影像。

诊断应用

自从20世纪70年代被发明后,X射线断层成像在医学影像上已经变成一个重要的工具,虽然价格昂贵,它至今依然是诊断多种疾病的黄金准则。X射线断层成像技术的优点之一是它可以提供很高的空间分辨率(0.5mm)。它的一个弱点是软组织对比度较差。当诊断对软组织对比度要求较高时,核磁共振影像技术要优于X射线断层成像技术。

头部断层检查

主要用来诊断脑部血管病变以及颅内出血,检查不一定要用到显影剂。在病人有急性中风的情形下,它虽然没办法排除血管阻塞的可能性,但是可以排除出血的可能性,如此一来,抗凝血剂就可以大胆地应用。在诊断肿瘤的应用上,电脑断层配合静脉显影的检查并不常用,而且效果也比核磁共振影像(magnetic resonance imaging,简称MRI)差。它也可以用来诊断颅内压是否有增加,例如要做腰椎穿刺前(或是评估ventriculoperitoneal shunt时)。

X射线断层成像在诊断有外伤的颅骨及颜面骨的骨折也有很大的用处。在头颈口的部位,对於头骨和颜面骨或是牙齿的畸形,它有术前评估的作用;下颚、副鼻窦、鼻腔,眼框等部位所生囊肿或是肿瘤的评估;慢性鼻窦炎成因的诊断;还有植牙重建的评估。

胸腔断层检查

在肺部组织的诊断上,X射线断层成像对於急性或是慢性的变化都有很高的诊断价值,在观察一些人体内空气的变化(例如肺炎)或是肿瘤,一般不需显影剂就有很好的效果了。而一些间质组织的变化(肺实质,肺纤维等等),可以用薄切面的高解析设定来重建;要评估纵隔腔和肺门部分的淋巴腺肿大,则需要静脉显影。

胸腔断层血管摄影(CTPA)它是一个需要用精确快速的时间来作对比剂注射再加上高速的螺旋式描扫器才能完成的检查,近来也用在作肺栓塞和动脉剥离的评估。当胸腔x光检查出现异常或是怀疑异常等,只要是非急性的,电脑断层都是首推的进一步检查。

心脏断层检查

随著旋转时间的减少(时间解析度,目前较先进的X射线断层成像仪的gantry旋转一周的时间通常在0.5秒左右,并在进一步降低),再加上多断层切面(multi-slice)的技术(高达64切),要同时达到高速度和高解析度不再是梦想,目前已经可以清楚地看见冠状动脉的影像。在扫描的同时,电脑就可以将一连串的数据重建,如此一来,每单一个心脏断层影像的数据都可以在x光管回转完成前重建完成,即使是目前转速最快的也一样,但未来是否能取代侵入性检查「冠状动脉导入检查」还是未知数。

心脏的多断层切面检查(Multi-slice Computed tomography,简称MSCT)有相当性的潜在危险,因为它的剂量相当於500张的胸腔x光,对於乳癌的潜在诱发性目前还有待商榷。诊断为阳性的正确率大约82%,诊断为阴性的正确率大约93%;敏感度大约81%,特异性为94%,【reference】最有价值的是这个检查的高诊断阴性正确率,因此,如果电脑断层诊断不出冠状动脉的疾病的话,病人应该找寻其他可能引起胸腔病灶的原因。

大部分用软体就可以找寻的病杜都是用以白种人为研究得到的数据来写的,所以严格来说,结果不完全适用在全人种。

双射源X射线断层成像机,2005年发明,有相当高的时间解析度(Temporal Resolution),可以减少高速心跳造成的移动假影,闭气的时间也不用长,对於不方便闭气的病人或是不适合打降低心率药的病人是很有帮助的。

腹部和骨盆的断层检查

对於腹部的疾病,X射线断层成像的诊断价值极高,常用来定位肿瘤期数也用来做后续的追踪,对急性腹痛的检查也很有用。泌尿结石,阑尾炎,胰脏炎,憩室,腹部动脉瘤还有肠阻塞等都是可以由电脑断层做快速诊断的疾病,它也是第一线用来诊断内部脏器外伤的利器。

口服或是直肠对比剂可视需要使用,稀释的硫酸钡(2% w/v)是最常用的,一般用来作大肠透视检查的钡剂浓度太高,在断层影像上反而是假影,如果钡剂有禁忌上的考量的话(例如怀疑病人是肠受伤),碘对比剂也是选择之一,其他种类的就看目标是要对哪一个器官显影,例如直肠的空气对比剂(空气或二氧化碳)用在大肠检查,或是口服纯水用在胃部检查。

电脑断层在诊断骨盆的应用上有限制在,特别是女性的骨盆,超音波是一个替代方案。除此之外,它也可以部分应用在腹部扫描(例如看肿瘤),在评估骨折上也有用处,它也可以用在研究骨质疏松症,和骨质密度侦量仪一样,此两样都能侦测骨矿物质的密度(BMD),也就是骨强度的指标,然而电脑断层的结果不一定和骨密仪一样(BMD测量黄金准则),不但贵,病人接受的剂量又高,所以不常使用。

四肢的检查

X射线断层成像常用来显示复杂的骨折,特别是节关附近的骨折,主要是因为它可以将想要看的地方重建出来。

优点和危险性

优於X光影像的部分

首先,X射线断层成像为医生提供器官的完整三维信息,而X光影像只能提供多断面的重叠投影;第二,由於电脑断层的高解析度,不同组织阻射过所得的放射强度(Radiodensity)即使是小於1%的差异也可以区分出来;第三,由于断层成像技术提供三维图像,依诊断需要不同,可以看到轴切面,冠状面,矢切面的影像,我们称它为多平面数位重建(Multi-planar reformated imanging)。除此之外,任意切面的图像均可通过插值技术产生。这给诊和科研带来了极大的便利。

辐射剂量

X射线断层成像被视为中度至高度辐射的诊断技术,虽然技术的进步已经增加了辐射的效率,但是同时为了增加影像品质或为了更复杂的技术,还是有增加剂量的考量,进化过的解析度使电脑断层可以进行新的研究,可以有更多的优点:例如和传统血管摄影比,电脑断层血管摄影可以避免插入静脉管和静脉导管;电脑断层大肠摄影也和大肠钡剂摄影一样用来诊断肿瘤,但是剂量更低。其方便性以及可适用的情形不断增加,使它日渐普及,最近在英国的综合评估中,电脑断层占了所有放射性检查的7%,但是在2000/2001年间,它占了总合医疗放射剂量的47%(Hart & Wall, European Journal of Radiology 2004;50:285-291),过度地使用电脑断层检查,不管其他地方怎么灭,还是会导致总体医疗剂量的上升,在一些特别研究放射剂量的论文还有考量很多因子:扫描的体积,PATIENT BUILD,扫描的数量和型式,还有需要的解析度和影像品质。

对比剂的负面反应

由於X射线断层成像相当依赖静脉注射的对比剂来显影,所以有潜在的危险,危险虽低,却无法完全避免,这可能会使某些病人的肾脏受伤,如果是有肾功能衰竭或糖尿病等病史的病人,(另外还有REDUCED INTRAVASCULAR VOLUME)危险性可能更高。

影像处理

X光断层面的数据是由X光射源绕物体一圈得来,感应器是放置於射源的对角位置,随著物体慢慢地被推入内侧端,数据也不断地处理,经由一系列的数字运算,也就是所谓的断层面重建来得到影像。

窗宽

所谓的窗宽(windowing)就是指用韩森费尔德(发明者)单位(Hounsfield Unit,简称HU)所得的数据来计算出影像的过程,不同的的放射强度(Raiodensity)对应到256种不同程度的灰阶值,这些不同的灰阶值可以依CT值的不同范围来重新定义衰减值,假设CT范围的中心值不变,定义的范围一变窄后,我们称为窄窗位(Narrow Window),比较细部的小变化就可以分辨出来了,在影像处理的观念上,我们称为对比压缩。例如我们为了要在腹内找出肝肿瘤的细微变化,就要用肝窗位,假设70HU是肝脏的平均值(称为肝窗位),我们就可以在更窄的窗宽内重新定义范围,窗位(Window)定为170HU,85HU为上,85HU为下,如此一来范围就是-15HU到+155HU,低於-15HU的指就显示全黑,高於+115HU的指就显示为全白,同理,骨的窗位就要用宽窗位(Wide Window),主要是考虑到含有脂肪的髓腔内的髓质还有外层致密骨,当然HU的中心值就大约要用百位的数字了。

三维重建

三维重建指用数学的方法从断层成像仪测量到的信号(X射线通过人体后的衰减)恢复(重建)出器官的三维影像。最简单的,也是最早的,重建方法是反投影法(backprojection)。反投影法虽然直观上很容易理解,但它在数学上是步正确的。目前常用的重建方法主要有两种:滤波反投影法(filtered backprojection)和卷积反投影法(convolution backprojection)。

图像显示

由於目前的X射线断层成像都是等方性(x,y,z轴的解析度都一样)或是接近等方性的解析度,显示的方式不一定只限於横切面,所以,藉著软体的帮忙,只要把所有的小体素堆叠起来,就可以用不同的视点来看影像。

多层面重建MPR(Multi-Planar Reconstruction)

这是重建最简单的方式,是把所有的横切面数据堆叠起来,软体可以用不同的平面来切割物体(大部分是垂直面),或是特别的一些影像例如最大强度投射成像MIP(Maximum-Intensity Projection)或是最低强度投射成像mIP(Mininum-Intensity Projection)。

多层面重建最常用来检查脊椎,因为轴切面的影像只限於有时才能显出椎体,也无法完全秀出椎间盘,经由重组影像,我们可以更容易观察出脊椎的位置以及其和其他器官的关系。

现代的软体可以重建斜位的影像,所以经由自由的选择平面,我们可以看到想看的解剖构造,比如支气管不是垂直的,我们可以藉由这个技术达到我们要的目的。

在血管的影像上,弯曲的平面也有办法重建。这使得弯曲的血管可以被「拉直」,如此整条血管可以用一张影像或是少数影像就可以完全显现,一旦血管被拉直后,量化的长度和宽度就测量出来,对於手术和侵入性治疗的帮忙不小。

MIP重建加强了高射束的区域,用在血管摄影很有用,mIP重建趋向於加强空气的显示,用来评估肺部结构很有用。

三维呈像技术(3D rendering techniques)

表面呈像(surface rendering)

放射强度(Radiodensity)的阀值是可以调整的(例如对应於骨头的值),当阀值一定,便可使用「边缘侦察(edge detection)」影像处理法,如此一来,一个三维的物体就可以呈像了,不同的物体可以用不同的阀值呈像,使用不同的颜色来代表不同的解剖构造,例如骨,肌肉和软骨,然而,在这个基础下,再深一层的构造可能就无法显像了。

体素呈像(volume rendering)

表面呈像只限於在一定的阀值下,表现物体的表面像,也止於呈现接近我们想像的表面,而在体素呈像中,利用透明度和颜色可以在单一影像中的特色,就可以呈现更多的东西,例如:骨盆就可以用半透明的方式显现,那么即使是斜位角,小部分其他的解剖呈像并不会挡住其他重要的部分。

影像分割(Segmentation)

有一些部位虽然结构不同,但是有相似的阻射性,只是单纯地改变体素呈像的参数可能不是这么简单就可以区分它们,解决的方式我们称为影像分割(segmentaion),就是用手动或是自动的方式去除我们不想要的部分。

例子

下面是一些脑部X射线断层成像的影像,骨头的部分比周围的地方白(白代表高阻射率),血管处(箭头)比较亮是因为使用了碘对比剂的关系。

历史

第一个商业化的X射线断层成像系统是由Godfrey Newbold Hounsfiled发明的,地点在英国Hayes的THORN EMI Central Research Laboratories,Hounfield在1967年开始了他的想法,於1972正式发表,声称电脑断层是披头四乐团最大的遗产,庞大的利益使得EMI投资了研究计划。另一头,TUFTS大学的Allen Mcleod Cormack 独立研发了类似的处理程序,地点是University of Cape Town/Groote Schuur Hospital,他们於1979年一起获得诺贝尔奖。

1971所产的原型是行经180度角取160个平行读数,每个是一度,每次扫描大约费时五分钟,整个影像要产生要花2.5小时并用大型电脑来进行运算。

第一个生产的X射线断层成像扫描器称为EMI描扫器,只能用来做头部的扫描,但是要花四分钟取数据,七分钟重组完成一个影像,另外它还要用一个装满水的perspex容器,型为头套状,可以包覆整个头,主要是为了减少头部的对比阻射强度相差太大(头骨和头骨外的差异),当时的解析度不高,只有80*80的画质,第一个EMI扫描器是安装在英国的wimbledon的atkinson morley's hospital,第一次进行病人头部检查的时间是1972年。

在美国,此机器的售价是390000,第一个是安装在lahey clinic,再来是massachusetts general hospital,还有1973在george washington大学。

第一个任何部位都能检查且不用水头套的电脑断层仪是在goergetown university由robert s.ladley. dds设计。

电脑断层机器的演进

第一代

用如笔头般细的射束打向一个或两侦检器,影像是用translate rotate的方法,将射源和侦检器放置於对侧的位置,两者相对位置不变,再加以旋转。在EMI描扫器时代,一对影像须要旋转180度,耗时四分钟,使用三个侦检器(其中一个是射源位置的参考),每个侦检器都是由碘化钠闪砾器和光电倍增管组成,部分的病人很不能适应这些早期的机器,因为机器的振动和声音都太大了。

第二代

这项设计增加了侦检器的数目,并且改变了射束的形状,把原本的笔头型改为扇型,旋转方式仍为translate rotate,但是扫描时间有明显的减少,旋转量也由每次一度增为每次三十度。

第三代

第三代X射线断层成像在获得影像的时间上有长足的进步,扇形的射束配上一列和射源相对的侦检器,省略了费时的translation stage,最初让扫描时间减少至大约一张十秒钟,这个进行让ct的实用性大大增加,时间短到可以做肺部和腹部的扫描,之前的几代只限於用在头部和四肢,到了第三、四代,病人也明显觉得噪音和振动都少了不少,舒适多了。

第四代

它的设计方法几乎和第三代是同时发明的,表现度也差不多,不用一列的侦检器,取而代之的是360度整圈的侦检器,用扇型射束旋转打在固定而非旋转的侦检器上。

bulky是一项昂贵且脆弱的光电倍增管,所以渐渐地被较好的侦检器取代,氙游离腔侦检器列曾经用在第三代机器中,也增加了较多的解析度和敏感度,但最终这两项技术都被固态侦检器取代:一个矩形、固态的发光二极体,并镀上莹光的稀土元素磷,它更小,更敏感,更稳定,也更适合第三、四代机器的设计。

早期的四代机器有600个光电倍增管,每个直径1/2吋,可以套在侦检环内,以三个发光二极体为单位可以替代一个光电倍增管,这项改变同时增加了取像速度和影像品质,但是扫描的速度仍然不能改善,因为x光管的控制还是用缆线启动,限制了旋转的速度。

一开始,第四代机器有一个重大的进步,就是每转一圈,侦检器就会自动校正一次;而三代的几何方式固定,对於没有校正的情形很敏感,也就是有环形假影产生的可能,另外,四代由於侦检器不会移动和振动,校正的执行也较容易。

所有现代的医疗用电脑断层都是以第三代的设计为蓝本,现代的固态侦检器相当地稳定,可以不须要每扫一个影像都校正一次,第四代由於侦检器经济效益的问题,使得它比第三代贵多了,甚至对假影的敏感度也高,因为没有固定和射源相对的侦检器,要去除散射几乎是不可能的事。

第五代

一般指的是所谓的摄影CT(cine-CT);Cine-CT与第四代CT相似,但X光源被置於侦办器的外环;而且为了加快扫瞄的速度,采用多管X光源,依序以不同位置之X光对剖面曝光,以取代旋转功能。系统扫瞄速度因而大大提升,足以扫瞄心跳等动态的剖面图。而真正所谓第五代CT,乃是以大角度阳极X光管,环绕扫瞄剖面与侦测器;利用电子方式控制撞击阳极的电子束,使其发出不同角度的X光束,以达到如同多管X光源的效果。由於电子扫瞄速度极快,每一剖面的扫瞄时间可降至33ms-100ms左右。。适用於心导管,做心脏、血管摄影,主要缺点剂量高,价格昂贵。

功能再进化

和取象时间有关,要克服的另一问题是x光管,要提供一个长时间,高强度的曝露,须要将非常稳定的输出加到x光管和发电器中,高速的回转阳极要跟上处像处理的速度,需要固定150kV的SMPS才能趋动他们,目前的动力强度可以到100kW

环刷回转(slip-ring)技术取代了原本缆线的设计,始得x光管和侦检器能连续动作,再加上连续地推移病人进入扫描器的设计,就是所谓的螺旋式电脑断层。

多层螺旋X射线断层成像(Multi-Detector-Row Computed Tomography,简称MDCT)的系统更加快了扫描的速度,它可以同时获取数个影像,目前的机器列数可以到64列,要在几秒内就有完整的胸腔影像也是有可能的,以前的检查假设要分十次闭气,一次十秒,现在可能一次十秒的闭气可以完成了。MDCT也是使用等方解析度,可用任意的角度重建你想要的影像,和核磁共振影像有一样的能力,在很短的时间就可以扫描很大的体积是MDCT最大的特色,然而更重要的事是空间解析度也要高,最新一代MDCT内在Z轴方向的球管内有浮动的焦班,可以让解析度更好,另一个不同的方向的研究是用在心脏的断层检查,称为电子光束断层描扫(Electron-Beam Computed Tomography,简称EBCT),时间解析度高达50微秒,它可以暂停心脏和肺部的动态来形成高品质的影像,只有Imatron公司有制造,后来GE公司跟进,鲜有人做,主要是因为它的成本太高,而且设计的用途只有一项而已,同期的MDCT其时间解析度就很接近EBCT了,但是成本低得多,也因为如此,MDCT就成了市场的趋向。

进化过的电脑技术和组像技术可以执行更快更准确的重组,早期的机器可能要几分钟才一张影像,现在则是三十秒就可以做出1000张影像,精心设计的软体已经可以灭少假影了。双射源电脑断层(Dual source)使用了两个x光管和两排侦检器,使得每张影像只要0.1秒就可以完成,如此就可以得到高品质的心脏影像而不需要用降低心率的药,例如beta blockers。

双射源的复列侦检器电脑断层可以在十秒的闭气时间内就完成整个心脏的检查。

Volumetric电脑断层是复列侦检断层机的一项延申,仍在研究阶段,目前的MDCT每转一次取样4cm宽的体积,volumetric电脑断层的目标是以256的复列侦检断层仪的原型为基础,增加宽度到10-20cm,未来的应用包括了心脏成像(在两次连续的心跳间就可以取得欲重建完整三维影像所需要的数据)。

微断层摄影(Microtomography)

近几年来,断层摄影也到了微米的等级,名为微断层摄影,但是这些机器目前只适合小物体或是动物,还不能用在人体。

显微镜成像系统主要有那些影响因素呢?

1、使用显微镜时,被检物体做的是否标准很重要。如:切片厚度是否太厚,盖玻片是否符合国标等。

2、显微镜物镜按档次可分为约6-8个档,最常用的为平场消色差物镜。如镜头档次太低,则成像质量会下降。因此,建议选择平场以上档次物镜。

3、聚光镜孔径光栏,尽量和物镜的数值孔径相符,才能得到最佳的图像分辨率。

4、调焦系统作为机械部分的重要部件,调焦精度也非常重要。对于生物学初学者或刚接触显微镜的操作者,熟练的使用调焦系统,能快速找到图像并聚焦,提高工作效率。

5、载物台在观察切片时,常做X,Y的移动。如:双层的机械移动平台,精度和稳定性较好,能在观察显微图像时提供好的成像质量。

6、非球面集光镜能提供非常均匀的照明光线,所观察到的显微图像衬度极佳。

7、视场光栏应根据观察不同的被检物体和物镜倍率开启到合适的位置,如开得过大或过小显微图像的视场亮度会受到影响。

8、照明系统如采用温度低,色温较高的照明装置,观察到的是分辨率和锐利度极高的显微图像。 9、采用柯拉照明系统,能调节光学的中心像,科研级的显微镜均采用此系统,为镜检和专业数码显微成像系统,提供优质的显微照片。

显微镜成像质量的好坏,除了上述的几个因素外,还有很多客观因素的影响,其中包括使用环境以及显微镜的保养、灰尘等因素。2100433B

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