狭叶山胡椒

利用各种表面消毒方法对采自海南岛三个地区的胡椒大田植株的外植体进行消毒试验,由于内源性污染,除胡椒成熟种子外,其它各种大田外植体的表面消毒均未能成功。以胡椒成熟种子无菌萌发的实生苗茎尖作外植体,在1/2MS(MS或B5)+1.5mg/LBA+0～0.2mg/LIAA(或NAA)上可实现丛生芽增殖。茎尖水平或竖直接种方法显著影响茎尖的增殖;水平接种茎尖的生长和增殖效果优于竖直茎尖接种方式。茎尖增殖率随BA浓度的增加而提高,但BA浓度大于2.0mg/L时会使苗芽的质量降低,愈伤组织产生严重,苗芽细小,抽出不明显,颜色发黄甚至变白。附加或不附加100mg/LAdSO4对丛生芽增殖没有明显影响。生根培养基以1/2MS+1.0mg/LIBA+0.5～1.0mg/LIAA为最优,生根率可达100%;在细沙∶土∶椰糠(1∶1∶1)的基质中常规炼苗,成活率可达98%以上。液体纸桥法对胡椒种胚进行培养,在不附加任何生长调节物质的培养基(MS、B5或SH)上只产生单苗,而在附加不同种类和不同浓度的生长调节物质的培养基上则诱导形成愈伤组织,但未能实现分化;以胡椒无菌萌发的实生苗胚轴和叶片切段作外植体进行培养,较易诱导产生愈伤组织,但难以实现分化。

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)的方法对狭叶松果菊组培苗不同部位、愈伤组织以及不同株系毛状根中的松果菊苷和绿原酸进行了含量测定,建立同时测定狭叶松果菊组织培养物中松果菊苷和绿原酸含量的高效液相色谱方法;实验采用Kromasil ODS C18柱,流动相为乙腈∶甲醇∶0.1%磷酸溶液(10∶15∶75);检测波长为330nm。结果表明松果菊苷和绿原酸在0～25μg/mL范围线性关系良好;平均回收率方面松果菊苷为97.6%(RSD=0.83%),绿原酸为98.5%(RSD=0.91%)。该法简便、准确,可作为狭叶松果菊组织培养物中松果菊苷和绿原酸的定量分析方法。