聚合酶链式反应简称PCR(Polymerase Chain Reaction) (又称:多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方。PCR又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。
中文名称 | PCR扩增 | 外文名称 | Polymerase Chain Reaction |
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全称 | 聚合酶链式反应 | 简介 | 体外酶促合成特异DNA片段的方法 |
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PC...
专利技术应用实现快速高效均衡扩增检测由光开关阵列、自聚焦透镜和尾纤准直器及变增益微光O/E装置组成的MEMS有机整体,在以16位单片机为核心的电控装置管理下,能在毫秒级时间内完成多个标本快速均衡扫描检...
生物化学、医用分析仪器专家。
采用CTAB法对基物培养获得的香蒲拟发网菌(Stemonitopsis typhina(Wiggers))进行总DNA提取,并用引物对其12S rDNA片段进行扩增,扩增产物序列长度为376 bp,探讨了香蒲拟发网菌的分子系统学关系。
为了研究PCR扩增的最适条件,以GRG受体第二外显子基因为对象,观察了影响PCR反应的因素.研究结果表明:最佳变性温度为92℃与94℃;最适的退火温度为58℃;最适的引物浓度为0.6,0.8μmol;以1.0U酶量结果最满意,最适dNTP浓度为100~150μmol/L,最适的镁离子浓度为2.0mmol/L;最佳循环次数为35个循环;该文可为希望引入PCR作为诊断实验的实验室提供有用的信息.
RT- PCR首先经反转录酶的作用以RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。
用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可。
RT-PCR反应受多个因素影响,如硫酸镁的浓度, 引物退火的温度,扩增的循环数等。
◇建议选择0.5-3.0 mM (相差0.5 mM)的硫酸镁作初步实验。
◇对于具有较高Tm的引物,增加退火和延伸时的温度对反应有利。较高的温度有利于减少非特异的引物结合,因而提高特异产物的得率。
◇大多数目标RNA经40轮PCR反应就能观察到。但如果目标RNA太稀少,或者只有很少的起始材料,有必要增加扩增的次数到45-50次。
这两种引物分别称为限制性引物与非限制性引物;其最佳比例一般为1:50~1:100,关键是限制引物的绝对量。限制性引物太多太少,均不利于制备ss-DNA。也可用普通PCR制备靶DNA双链DNA(ds-DNA),再以ds-DNA为模板,只用其中一种过量引物进行单引物PCR制备ss-DNA。
产生的ds-DNA与ss-DNA由于分子量不同可以在电泳中分开,而得到纯ss-DNA。
不对称PCR主要为测序制备ss-DNA,尤为用c-DNA经不对称PCR进行DNA序列分析是研究真核DNA外显子的好方法。