咔唑比色法

(1) 新鲜样品称取试样30~50g，用小刀切成薄片，置于预先放有无水乙醇的500mL锥形瓶中。装上回流冷凝器，在水浴上沸腾回流15min后，冷却。用布氏漏斗过滤，残渣移至研钵中，一边慢慢磨碎，一边滴加70%的热乙醇，冷却后再过滤，反复操作至滤液不呈糖的反应(用苯酚一硫酸法检验)为止。残渣用无水乙醇洗涤脱水，再用乙醚洗涤以除去脂类和色素，漏斗中残渣在空气中挥发去乙醚。

(2) 干燥样品 研细，过60目筛，取5~10g样品于烧杯中，加入热的70%乙醇，充分搅拌以提取糖类，过滤。反复操作至滤液不呈糖的反应。残渣用无水乙醇洗涤，再用乙醚洗涤，最后让乙醚挥发掉。

(1) 水溶性果胶提取用150mL水将上述挥发至干的残渣移人250ml烧杯中，加热至沸并保持沸腾1h，随时补足蒸发的水分，冷却后移入250mL容量瓶中，加水定容，摇匀，过滤，弃去初滤液，收集滤液即为水溶性果胶提取液。

(2) 总果胶的提取用150mL加热至沸的0.05mol/L盐酸溶液把挥干的残渣移入250mL锥形瓶中，装上冷凝器，于沸水浴中加热回流1h，冷却后移入250mL容量瓶中，加甲基红指示剂2滴，加0.5mol/L氢氧化钠中和后，用水定容，摇匀，过滤，收集滤液即为总果胶提取液。

(3) 标准工作曲线的制作取8支50mL比色管，各加入12mL浓硫酸，置冰水浴中，边冷却边缓缓依次加入浓度为0mg/L、10mgL/、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的半乳糖醛酸标准溶液2mL，充分混合后，再置冰水浴中冷却。然后在沸水浴中准确加热10min，用流动水迅速冷却到室温，各加入0.15%咔唑试剂1mL，充分混合，置室温下放置30min，以0号管为空白在530nm波长下测定吸光度，绘制标准工作曲线。

(4) 测定取果胶提取液，用水稀释到适当浓度(含半乳糖醛酸10~70mg/L)。取2mL稀释液于50mL比色管中，以下按制作标准曲线的方法操作，测定吸光度。从标准曲线上查出半乳糖醛酸浓度(mg/L)。

计算公式如下:

式中X-样品中果胶物质(以半乳糖醛酸计)的质量分数，%;

c-从标准曲线上查得的半乳糖醛酸浓度，mg/L;

V-果胶提取液总体积，mL;

K-提取液稀释倍数;

m-样品质量，g。

(1) 糖分的存在对咔唑的呈色反应影响较大，使结果偏高，故样品处理时应充分洗涤以除去糖分。

(2) 检验糖分的苯酚一硫酸法:取检液1mL，置于试管中，加入5%苯酚水溶液1mL，再加入硫酸5mL，混匀，如溶液呈褐色，证明检液中含有糖分。

(3)硫酸的浓度对呈色反应影响较大，半乳糖醛酸在低浓度的硫酸中与咔唑试剂的呈色度极低，甚至不显色，只有在浓硫酸中才可使其显色，且颜色深浅与浓硫酸浓度和纯度有关。故在测定样液和制作标准曲线时，应使用同规格、同批号的浓硫酸，以保证其浓度、纯度一致。

(4 )本法的测定结果以半乳糖醛酸表示，因不同来源的果胶中半乳糖醛酸的含量不同，如甜橙为77.7%，柠檬为94.2%，柑橘为96%，苹果为72%~75%。若把结果换算为果胶的含量，可按上述关系计算换算系数。

分光光度计，恒温水浴锅

(1) 95%乙醇或无水乙醇。

(2) 70%乙醇。

(3) 乙醚。

(4) 0.05mol/L盐酸溶液。

(5) 0.5mol/L氢氧化钠溶液。

(6) 0.15%咔唑试剂

称取化学纯咔唑0.15g，溶解于精制乙醇中，并定容到100mL。咔唑溶解缓慢，需加以搅拌。

(7) 精制乙醇

取无水乙酵或95%乙醇1000mL，加入锌粉4g，硫酸(1:1) 4mL，在水浴中回流10h，用全玻璃仪器蒸馏，馏出液每1000mL加锌粉和氢氧化钾各4g，重新蒸馏一次。

(8) 半乳糖醛酸标准贮备溶液

准确称取半乳糖醛酸100mg，溶于蒸馏水并定容到100mL，得浓度为1 mg/mL半乳糖醛酸标准贮备液。

(9) 半乳糖醛酸标准工作液

分别准确吸取0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、7.0mL半乳糖醛酸标准贮备溶液于8个100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得一组浓度分别为0mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的半乳糖醛酸标准工作液。

(10) 浓硫酸优级纯。

(11) 甲基红指示剂。

中文名称: 3-溴咔唑

中文别名:3-溴咔唑;3-溴-9氢-咔唑

英文名称: 3-Bromo-9H-carbazole

英文别名: 3-BROMO-9H-CARBAZOLE;2-bromo-9H-carbazole;3-BROMOCARBAZOLE

产品编号: YCY159

CAS号: 1592-95-6

分子式: C12H8BRN

分子量:246.1

蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸，丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。