封片

机器胶带封片机不用树胶，只用少量二甲苯即可封片。使 用方便，切片诊断后即可归档，不会因树胶不干造成粘片等。使用封片机时，首先检查二甲苯瓶，并检查滴 液分注量，检查胶带可用量、选择胶带长短规格，检查接片筐是否安装到位。工作时开通电源，并打开过滤网开关。工作完成后，关闭2个电源，擦拭机器。

手工封片应注意以下七点。

(1)所用树胶浓度要适中，以一般速度滴 下并恰能成珠既可。太稀时易溢出玻片，当二甲苯挥发后，组织切片就会收缩产生胶不匀并出现大片气泡。太浓时，滴在玻片上树胶不易散开，易产生气泡，难以驱除，并影响折光率。

(2)树胶用量多少应根据组织大小、厚薄而定。

(3)应迅速敏捷滴胶。

(4)封片时，切片上应保留适当的二甲苯，以防干封，产生气泡。

(5)为防止气泡，封片时，树胶不宜搅动。

(6)如遇有小气泡时可用镊子轻压盖玻片，排除气泡。

(7)封片时，若离面部较近，鼻、口呼出的气体会有水分造成切片云雾状甚至模糊不清，需引起注意。

机器盖玻片封片机采用模拟人工手法来完成封片工作。使用机器 封片，封片效率高、质量好，同时可减少封片对技术人员身体的伤害。其操作步骤为如下。

(1)接通电源，打开开关，机器进行白检后，指示灯变绿即可工作。

(2)将染色完成的染色篮准确的放人封片机内。

(3)按动开始键，封片机进入工作状态。

(4)封片结束后报警，即可取出封好的切片。 机器盖玻片封片机的盖玻片采用24×40、24×50、24×60等规格的盖片(目前国产免洗盖玻片已代替进口，使用效果良好)。

机器封片工作站:

将常规染色机盖片机组合起来就可成为一个集成式的全自动化染色/盖片工作站，一起创造出高度灵活的系统，带来无需守候的便利。在完成染色处理后，创新性的机械臂可将载玻片架从染色机转送到盖片机中。不再需要在染色机和盖片机之间手动操作载玻片架。

使用机器封片有以下五个优势:

1 真正实现无人操作:可以单独运行或与染色机配套使用，真正实现无人操作。

2 每小时盖片400张:使用标准载玻片和不同尺寸的盖玻片，每小时盖片400张，提高实验室的生产力和工作效率。

3 开放式系统设计:可以使用各种封固剂，实现高度的灵活性。

4 更多的灵活性:能同时满足不同应用，如组织学和细胞学应用，呈现更多的灵活性。

5 废气排放系统:集成的废气排放系统带活性炭滤网，降低空气中二甲苯或二甲苯替代品的浓度，减少实验室工作人员暴露于有害废气中。

Vector公司提供多种水溶性和脂溶性封片剂,适合于不同底物。此外,Vector公司还提供多种房防止荧光萃灭的封片剂(染色片可保存1-2个月)和带有染色细胞核(DNA)的封片剂(用于ISH或衬染DNA的实验等)。

货号:H-1000

包装:10ml/瓶

价格:电议

H-1000, Mounting Medium, 400张/10ml 防荧光萃灭效果尤好,长期保存。 FITC,Texas Red,Rhodamine,AMCN等。

H-1200 ,Mounting Medium with DAPI,含DAPI 400张/10ml ,防荧光萃灭;含DAPI,可衬染细胞核;用于ISH或衬染DNA的实验。 PE,FITC等。

H-1300 ,含PI 400张/10ml ,防荧光萃灭;含PI,可衬染细胞核;用于ISH或衬染DNA的实验。 FITC等。

H-1400, HardSet Mounting Medium, 400张/10ml 凝固性;防荧光萃灭;适于油镜观察。 FITC,Texas Red,Rhodamine等。

H-1500 HardSet Mounting Medium with DAPI, 400张/10ml 凝固性;防荧光萃灭;含DAPI,可衬染细胞核,用于ISH或衬染DNA的实验;适于油镜观察。 FITC,Texas Red,含DAPI Rhodamine等。

H-5000 ,Permanent Mounting Medium ,240张/60ml 非水溶性,无毒、无味;清晰;和底物BCIP/NBT联用,可将结晶减至最小。长期保存。 HRP和AP的底物。

H-5501, AQ Aqueous Mounting Medium ,240张/60ml 水溶性,适于反应产物为酒精或其它有机溶剂溶性的底物。 大多数HRP和AP的底物如AEC,DAB, BCIP/NBT, Vector SG.

1.工作原理

石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与贴片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。

应根据要求选取材料来源及部位。例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取;猪的肝小叶边界清晰明确;耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。

用适当的化学药液--固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。固定液可分为单一固定液及混合固定液。前者有甲醛(乙醛、福尔马林)、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸(四氧化锇)、重铬酸钾及苦味酸等，单一固定液不能固定细胞中的所有成分;混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液(配方见有关技术书籍)。因此，应根据所要显示的内容来选择适宜的固定液。10%福尔马林(4%甲醛)或10%磷酸缓冲福尔马林是病理切片常规使用的固定液，不仅适用于常规H精-伊红)染色，还可以用于组织学有关的其他技术的切片染色。固定液的用量通常为材料块的20倍左右，固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为1小时至24小时。

固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。该步骤称作洗涤多数用流水冲洗;使用含有苦味酸的固定液固定的则需用酒精多次浸洗;使用酒精或酒精混合液固定的组织，则不必洗涤，可直接进行脱水。固定后或洗涤后的组织内充满水分，若不除去水分则无法进行以后的透明、浸蜡与包埋处理，原因在于透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不能脱尽，苯类无法浸入。酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混。为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30%或50%酒精开始，经70%、85%、95%直至纯酒精(无水乙醇)，每次时间为1~数小时，如不能及时进行各级脱水，材料可以放在70%酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化，不宜处理过久。正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陆环等也可做脱水剂。

纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各种透明剂均是石蜡的溶剂。通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1~2小时，再转入纯透明剂中浸渍。透明剂的浸渍时间则要根据组织材料块大小及属于囊腔抑或实质器官而定。如果透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织;透明时间过长，则组织硬化变脆，就不易切出完整切片，最长为数小时。

用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。通常先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1~2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利石蜡浸入组织内。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中(摆好在蜡中的位置)，待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。如果包埋的组织块数量多，应进行编号，以免差错。石蜡熔化后应在蜡箱内过滤后使用，以免因含杂质而影响切片质量，且可能损伤切片刀。通常石蜡采用熔点为56~58℃或60~62℃两种，可根据季节及操作环境温度来选用。

包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为4~7微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。

用粘附剂将展平的蜡片牢附于载玻片上，以免在以后的脱蜡、水化及染色等步骤中二者滑脱开。粘附剂是蛋白甘油。首先在洁净的载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，再将一定长度蜡带(连续切片)或用刀片断开成单个蜡片于温水(45℃左右)中展平后，捞至玻片上铺正，或直接滴两滴蒸馏水于载玻片上，再把蜡片放于水滴上，略加温使蜡片铺展，最后用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入45℃温箱中干燥，也可在37℃温箱中干燥，但需适当延长时间。

干燥后的切片需脱蜡及水化才能在水溶性染液中进行染色。用二甲苯脱蜡，再逐级经纯酒精及梯度酒精直至蒸馏水。如果染料配制于酒精中，则将切片移至与酒精近似浓度时，即可染色。

染色的目的是使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色以便于观察。未经染色的细胞组织其折光率相似，不易辨认。经染色可显示细胞内不同的细胞器及内含物以及不同类型的细胞组织。染色剂种类繁多，应根据观察要求及研究内容采用不同的染色剂及染色方法，还要注意选用适宜的固 定剂才能取得满意的结果。经典的苏木精(Hematoxylin)和伊红(曙红，Eosin)染色法是组织学标本及病理切片标本的常规染色，简称HE染色。经HE染色后，细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。由于苏木精是带阳离子的染料，染液呈碱性，核内染色质及胞质内核糖体等物质对这种染料有亲和性，称嗜碱性;而带阴离子的染料伊红配制的染液呈酸性，对这种染料的亲和性，称嗜酸性。有时不同的组织结构还需要用特殊的染料及染色方法加以显示，称特殊染色。有些细胞组织经硝酸银浸润后，可使溶液中银离子还原成金属银或银粒附着在细胞组织上，呈棕黑色，这种性质称亲银性，而有些细胞组织本身不能使硝酸银的银离子还原成金属银，还需加还原剂才能将银离子还原，称嗜银性。

染色后的切片尚不能在显微镜下观察，需经梯度酒精脱水，在95%及纯酒精中的时间可适当加长以保证脱水彻底;如染液为酒精配制，则应缩短在酒精中的时间，以免脱色。二甲苯透明后，迅速擦去材料周围多余液体，滴加适量(1~2滴)中性树胶，再将洁净盖玻片倾斜放下，以免出现气泡，封片后即制成永久性玻片标本，在光镜下可长期反复观察。注意有些染料需特定厂家生产的产品。根据各种染色方法、组织类别及切片厚度，掌握适宜的染色时间，才能达到较好的染色效果。

石蜡制片程序及环节繁多，需数日才能完成1个周期，但切片可长期保存，供教学、科研及病理诊断及复察，并可利用蜡块作其他项目的回顾性研究。病理常规制片过程中已简化了一些细的环节或缩短了部分处理时间以适应临床需要(可缩短至2天)。虽然冰冻切片大大快于石蜡切片，但所显示的形态结构却不如后者，因此病理医生最后还需要根据石蜡切片作出准确诊断。近些年来，在病理常规制片过程中采用了微波技术，从而大大缩短了制片过程，而且对形态结构并没有影响。微波是一种波长很短、频率却很高的高频电磁波[波长为1米 ~1毫米，频率为300兆赫(MHz)~300千兆赫(GHz)]。组织经微波辐射后加速组织内部分子的高速运动，以使液体的运输加快，增加弥散、渗透和交换效率，从而加速组织的固定、脱水、透明、包埋和染色各个环节。例如常规福尔马林固定需数小时~1天，而且能引起组织收缩及某些抗原成分不同程度的受到破坏，微波固定仅需1~2分钟，且可减少抗原的丢失和损害。选择适当的档次(功率)、辐射时间和温度是极为重要的。目前微波技术的应用在国内尚处于起步阶段，许多技术应用环节尚需进一步摸索。

石蜡切片不仅是经典的方法，又是最基本的方法，它与其他新的技术方法相结合，使传统的老技术扩大了应用范围，开辟了许多新领域，增加了许多新的研究、观察内容。随新的仪器及新的研究技术的不断问世及使用，使组织学的观察研究从简单的形态结构深入到各种成分的定性观察，又从定性转向定量计测，使细胞组织的形态，功能及代谢三结合，从而达到定性可靠、定位准确及定量可测。