二硫腙比色法

分液漏斗、分光光度计。

1.样品的消化:同"砷的测定"中硝酸-高氯酸-硫酸法或硝酸-硫酸法。

2.标准曲线的绘制

吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml锌标准使用液，分别置于125ml分液漏斗中，各加入C(HCl)=0.02mol/L盐酸至20ml。漏斗中，备加c(HcL)=o.02M1儿盐酸至20m1。然后分别加入10ml乙酸-乙酸盐缓冲液、1m125%硫代硫酸钠溶液，摇匀，再各加入10.0ml二硫腙使用液，剧烈振摇2min。静置分层后，四氯化碳层经脱脂棉滤入lcm比色杯中，以零管调节零点，于波长530nm处测定吸光度、绘制标准曲线或求出回归方程。

3.样品溶液和试剂空白液油定

吸取5.0ml~10.0ml消化后定容的样品溶液和相同量的试剂空白液，分别置于125m1分液漏斗中，加5m1水、0.5ml20%盐酸羟胺溶液，摇匀，再加2滴酚红指示剂，用1:1氨水调至红色，再多加2滴。再加5ml 0.01%二硫腙-四氯化碳溶液，剧烈振摇2min，静置分层。将四氯化碳层移入另一分液漏斗中，水层用少量二硫腙-四氯化碳溶液振摇提取，每次2mL~3ml，直至二硫腙-四氯化碳溶液绿色不变为止。合并提取液，用5m1水洗涤，四氯化碳层用C(HCl)=0.02mol/L盐酸提取2次，每次10ml，提取时剧烈振摇2min，合并C(HCl)=0.02mol/L盐酸提取液，并用少量四氯化碳洗去残留的二硫腙。以下自"加入l0ml乙酸-乙酸盐缓冲溶液"起，按标准曲线绘制操作方法进行操作。根据测得吸光度从标准曲线上查得相当于锌的含量，或将吸光度代入回归方程求得锌的含量。

样品经消化后，在pH4.0~4.5时，锌离子与二硫腙生成紫红色配合物，溶于四氯化碳，与标准系列相比较进行定量。

1.C(CH3COONa)=2mol/L乙酸钠溶液:称取68g乙酸钠(CH3COONa·3H2O)，加水稀释至250ml。

2.C(CH3COOH)=2mol/L乙酸溶液:量取10.0ml冰乙酸，加水稀释至85ml。

3.乙酸-乙酸盐缓冲溶液C(CH3COONa)=2mol/L乙酸钠溶液与C(CH3COOH)=2mol/L乙酸溶液等体积混合，此溶液PH为4.7左右。用0.01%二硫腙四氯化碳溶液提取数次，每次10ml，除去其中的锌，至四氯化碳层绿色不变为止，弃去四氯化碳层，再用四氯化碳提取乙酸-乙酸盐缓冲液中过剩的二硫腙，至四氯化碳层无色，弃去四氯化碳层。

4.1:1氨水。

5.C(HCl)=2mol/L盐酸:最取10ml盐酸，加水稀释至60ml。

6.C(HCl)=0.02mol/L盐酸:吸取1ml C(HCl)=2mol/L盐酸，加水稀释至100ml。

7.酚红指示剂:0.1%乙醇溶液。

8.20%盐酸羟胺溶液:称取20g盐酸羟胺，加60ml水，滴加1:1氨水，调节PH至4.0-5.5，以下操作同乙酸-乙酸盐缓冲溶液的处理。然后加水稀释至100ml。

9.25%硫代硫酸钠溶液:用C(CH3COOH)=2mol/L乙酸溶液调节PH至4.0-5.5。以下按试剂3中用0.01%二硫腙-四氯化碳溶液，处理。

10.0.01%二硫腙-四氯化碳溶液。

11.二硫腙使用液:吸取1.0ml的二硫腙-四氯化碳溶液，加四氯化碳至10.0ml，混匀。用1cm比色杯，以四氯化碳调节零点，于波长530nm处测吸光度(A)，用下式计算出配制100ml的二硫腙使用液(57%透光率)所需0.01%二硫腙-四氯化碳溶液毫升数(V)。

12.锌标准溶液:准确称取0.1000g锌，加10mlC(HCl)=2mol/L盐酸，溶解后移入1000ml溶量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于100μg。

13.锌标准使用液:吸取1.0ml锌标准溶液，置于100ml的容量瓶中，加1mlC(HCl)=2mol/L盐酸，以水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1μg锌。

式中:

a1--测定用样品消化液中锌的含量(μg)

a0--试剂空白液中锌的含量(μg);

m--样品质量(体积)[g(ml)];

V1--样品消化波速体积(nII);

V2--测定用样品消化液的体积(m1)。

1.测定时加入硫代硫酸钠、盐酸羟胺和在控制pH值的条件下，可防止铜、汞、铅、铋、银和镉等离子的干扰。并能防止二硫腙被氧化。

2.所用玻璃仪器用10%一20%硝酸浸泡24h以上，然后用不含锌的蒸馏水冲洗洁净。

3.硫代硫酸钠是较强的配合剂，它不仅配合干扰金属，同时也与锌配合.所以只有使锌从配合物中释放出来，才能被二硫腙提取，而锌的释放又比较缓慢，因此必须剧烈根据2min。