随机引物

适用于长的或具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。

OligodT

适用于具有PolyA尾巴的RNA。(原核生物的RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA和tRNA不具有PolyA尾巴。)由于Oligo dT要结合到PolyA 尾巴上,所以对RNA样品的质量要求较高,即使有少量降解也会使全长cDNA合成量大大减少。

基因特异性引物

与模板序列互补的引物,适用于目的序列已知的情况。

RT-PCR技术造价信息

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PCR 梯度 MG96G 型|2台 1 查看价格 杭州朗基科学仪器有限公司 浙江  杭州市 2015-12-16
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PCR 中文彩屏L 系列 MGL48型|8台 1 查看价格 杭州朗基科学仪器有限公司 浙江  杭州市 2015-08-12
PCR 普教系列 F 96G 型|2台 1 查看价格 杭州朗基科学仪器有限公司 浙江  杭州市 2015-04-30

RT- PCR首先经反转录酶的作用以RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。

用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可。

1.从细胞或特定组织中提取总RNA;

2.逆转录实验;

3.扩增内参和目的基因并比较基因表达差异。

RT-PCR技术引物选择常见问题

  • 隔膜泵技术参数怎么选择?

    首先就是要确定你的流量,你输送介质的粘稠性,密度。 隔膜泵的参数都是以清水为基准的。如果你的介质粘度密度大要选大一个型号, 还有管道的确定,上下差一个单位应该都可以,不要差太多,至于泵体材质,膜片什么...

  • 实时荧光定量PCR仪国产有哪些,价格及相关技术参数?

    BiosaferPCR仪参数参考:1、样品台:标准模块:96×0.2ml+77×0.5ml混合模块;可另选384well模块A;96*0.2mL模块B;54*0.5mL模块C2、温度范围:0℃—99℃...

  • PCR仪如何设置

    1、按 PCR 仪正面左下角电源开关,启动 PCR 仪。2、放 PCR 离心管,先把顶盖向上扳,再往前推,露出放样孔,PCR 管放入前应加好反应体系各组分,再放入 PCR 离心管。3、反向重复第二步骤...

RT-PCR反应受多个因素影响,如硫酸镁的浓度, 引物退火的温度,扩增的循环数等。

◇建议选择0.5-3.0 mM (相差0.5 mM)的硫酸镁作初步实验。

◇对于具有较高Tm的引物,增加退火和延伸时的温度对反应有利。较高的温度有利于减少非特异的引物结合,因而提高特异产物的得率。

◇大多数目标RNA经40轮PCR反应就能观察到。但如果目标RNA太稀少,或者只有很少的起始材料,有必要增加扩增的次数到45-50次。

RT-PCR技术引物选择文献

利用RT-PCR技术检测吊瓜病毒种类的研究 利用RT-PCR技术检测吊瓜病毒种类的研究

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小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaicvirus,WMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)和番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是危害葫芦科作物最严重、最广泛的5种病毒。根据已知的5种病毒序列设计特异性引物,对感染病毒的吊瓜总RNA进行RT-PCR扩增。结果表明长兴吊瓜的病毒种类主要为PRSV,感染率为100%,无复合病毒感染。吊瓜植株不同取样部位(茎尖、卷须、嫩叶、茎、花、子房、老叶等)的RT-PCR表明老叶是较好的病毒检测取样部位,而嫩叶是吊瓜脱毒最佳的外植体取样部位。对茎尖的PRSV表达量高过幼叶的原因也进行了分析,认为可能是病毒的表达量与植株的代谢强度有关。

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GI和GII型诺如病毒双重荧光RT-PCR法检测 GI和GII型诺如病毒双重荧光RT-PCR法检测

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目的建立应用Allglo探针同时检测GI和GII型诺如病毒的双重荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法设计针对GI和GII型诺如病毒开放阅读框架ORFl及ORF2为目的基因的引物和Allglo探针,优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系;对该方法的特异性、抗干扰性、灵敏度进行评估,对96份临床粪便标本进行检测、测序分析。结果该方法特异性强,与轮状病毒、扎如病毒、星状病毒、腺病毒同时检测无交叉反应;同一体系下GI或GII型诺如病毒相互之间没有干扰;最低检测限均为10 copies/μL;对96份临床粪便标本进行检测,结果与单重荧光RT-PCR方法符合率100%,且测序结果显示目标序列正确。结论本研究建立的Allglo探针法检测GI和GII型诺如病毒技术特异性好,灵敏度高,可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速筛查。

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加大截面加固技术,柱外包(粘)型钢加固技术

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框架梁柱去除大开间技术

剪力墙、梁、柱、板开洞切割技术

裂缝灌浆技术

钢筋植筋技术

新旧混凝土界面处理技术

火灾、震后加固技术

抗震加固、隔震技术

无损切割技术

粘贴钢板加固法,是指用胶黏剂将钢板粘贴在构件外部的一种加固方法。该法在建筑,桥梁等工程的加固、补强、修复中的应用较为广泛。

原理

用粘结剂粘贴钢板补强、加固的钢筋混凝土结构构件,能大大提高其原设计承载力和抗破坏能力。这是因为粘贴钢板后,提高了原结构构件的配筋量,相应就提高了结构构件的抗拉、抗弯、抗剪等方面的力学性能,而这些性能是靠结构胶粘剂的良好粘结性能,把钢板与混凝土牢固地粘结在一起,形成整体,有效地传递应力,共同工作来保证的。

适用范围

1、适用于承受静力作用的一般受弯及受拉构件。

2、使用环境温度不超过5~60℃,相对湿度不大于70%及无化学腐蚀的使用条件为限,否则应采取有效的防护措施。

3、当构件混凝上强度等级低于Cl5 时,不宜采用本法加固

施工工艺

粘贴面处理 → 加压固定及卸荷系统准备(根据实际情况和设计要求,卸荷步骤有时省去) →胶粘剂配制 →涂胶和粘贴 → 固化、卸加压固定系统 → 检验 → 维护

表1-1物流技术分类表

物流技术硬技术材料:集装材料、包装材料等机械:装卸机械、包装机械、运输机械等

设施:仓库、车站、港口、机场、铁路、装载、吊装设备等

软技术计划:对流通形态与硬技术进行规划研究与改进的工作

运用:对运输工具的选择使用、装卸方法、库存管理、劳务管理

评价:成本计算等

物流技术与生产技术是比较容易混淆的,下面我们看看它们的区别,通过对比更准确地把握物流技术的概念。

表1-2物流技术与生产技术对比表

生 产 技 术 物 流 技 术

为社会提供有形物质为社会提供无形服务

直接与科学技术新动向相适应间接地被动地适应多样化需求

监测技术这里着重介绍环境监测中污染物的测试技术。如空气检测,水质检测。

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