3-硝基苄基膦酸二乙酯

目前国外测定3-硝基丙酸的方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等。我国建立了测定3-硝基丙酸的薄层色谱法。

本方法适用于甘蔗中3-硝基丙酸的测定。

样品中的3-硝基丙酸经提取，净化及浓缩，点样液于硅胶薄层板上，展开后喷以3-甲基-2-苯并噻唑啉酮水合盐酸盐(MBTH)显色剂，在长波紫外光灯下显示黄色荧光点，利用目视定量或薄层扫描仪测定其含量。

以下试剂均为分析纯。

(一)乙酸乙酯、三氯甲烷、苯、冰乙酸。

(二)无水硫酸钠、2%碳酸氢钠、85%磷酸，6mol/L盐酸。

(三)硅胶G。

(四)显色剂:0.5%MBTH水溶液，置于4℃冰箱保存，每3d重新配制;

(五)展开剂:苯:冰乙酸(9+1，V/V);确证用展开剂为石油醚:冰乙酸(9+1，V/V)。

(六)3-硝基丙酸标准溶液:精确称取3-硝基丙酸标准品，用乙酸乙酯制成储备液，再将此液用乙酸乙酯稀释成使用液，此标准溶液含3-硝基丙酸20μg/mL，置4℃保存。

(一)岛津CS-910双波长扫描仪及C-EIB微处理机。

(二)减压吹气浓缩装置。

(三)层析槽:内径25cm，宽6cm，高4cm。

(四)喷雾装置:日本岛津公司产。

(一)提取和净化

1. 甘蔗样品:取经去皮后切碎挤压得到的甘蔗汁10mL，置于100mL分液漏斗中，用6mol/L盐酸调节pH至2~3，用乙酸乙酯等体积提取三次，合并乙酸乙酯层于另一100mL分液漏斗中，用2%碳酸氢钠溶液30mL和10mL分别提取，振摇2min，静置分层，将水相置于另一100mL分液漏斗中，弃去乙酸乙酯层。用三氯甲烷20mL提取碳酸氢钠层，弃去三氯甲烷层，用6mol/L盐酸调节pH至2~3，用乙酸乙酯40mL、30mL、20mL分别提取，将乙酸乙酯吸出于150mL梨形瓶中，浓缩至干，用少量乙酸乙酯洗瓶壁数次，分别在40~45℃水浴中减压浓缩至干，加1mL乙酸乙酯定容，待测定。

2.甘蔗样品:将市售经冰冻的样品去皮后切碎，取20g置具塞200mL锥形瓶中，加无水硫酸钠20g，混匀，加乙酸乙酯60mL，85%磷酸0.12mL，浸泡30min后，振荡30min，且粗滤纸过滤，取滤液30mL于100mL分液漏斗中。以下按五(一)1"用2%碳酸氢钠溶液"方法操作。

(二)薄层色谱测定

1. 制板:取硅胶G3g，加水10mL，搅成匀浆，涂布于三块5cm×20cm玻璃板上，薄层厚度为0.3mm，干燥后于110℃烘烤3h后，置干燥器中备用。

2. 点板:以薄层板的短边为底边，距底边3cm的基线上用微量注射器滴加10μL标准液(20μg/mL)一个点，10μL样液两个点，在其中一个10μL样液点上再滴加10μL标准液(20μg/mL)。

3. 展开:上行展开16cm，展开剂为苯:冰乙酸(9+1，V/V)。

4. 显色:展开后的薄层板经挥干后，喷以显色剂至刚刚潮湿，置145~150℃烤箱中烘烤15min，冷却后，在波长365nm紫外光灯下目视定量或用薄层扫描仪定量。3-硝基丙酸的Rf值约为0.39。

5. 扫描条件:岛津CS-910双波长薄层扫描仪，用氙灯作光源，在380nm激发波长，500nm发射波长条件下，测量标准与样液斑点的荧光。

6. 目测条件:在波长365nm紫外光灯下观察，结果判定如下:

(1)标准点应出现黄色荧光;

(2)如样液点在标准点相应处未出现黄色荧光，则样品中3-硝基丙酸的含量在测定方法灵敏度以下。如在相应位置上有黄色荧光点，而另一点中样液点与标准点重叠，则为阳性。根据样液点的荧光强度估计减少滴加微升数，或稀释后滴加不同微升数，直至样液点与标准点的荧光强度一致为止。

7. 确证试验:用石油醚:冰乙酸(9+1，V/V)展开至16cm，挥干后显色，再测定，Rf值约为0.23。

式中:M--样品中3-硝基丙酸的量，μg/g或μg/mL;

0.2--3-硝基丙酸的最低检出量，μg;

V1--加入乙酸乙酯的体积，mL;

V2--出现最低检出量时滴加样液的体积，mL;

D--样液的总稀释倍数。

W--甘蔗取样质量，g;或甘蔗汁取样质量，mL。

本方法的灵敏度为2mg/kg。

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  苄基氯结构式：​​

中文名称:苄基氯

中文同义词:氯化苄;苄基氯;α-氯甲苯;苯氯甲烷;氯苯甲烷;氯苄;氯代甲苯;氯化苄(工业级)

英文名称:Benzyl chloride

英文同义词:BENZYL CHLORIDE;A-CHLOROTOLUENE;ALPHA-CHLOROTOLUENE;AKOS BBS-00003953;(chloromethyl)-benzen;(Chloromethyl)benzene;(chloromethyl)-Benzene;1-Chloromethylbenzene

CAS号:100-44-7

分子式:C7H7Cl

分子量:126.58

EINECS号:202-853-6

Mol文件:100-44-7.mol

中文名称:氰甲基膦酸二乙酯

英文名称:Diethyl cyanomethylphosphonate

中文别名:二乙基氰甲基磷酸酯;氰甲基磷酸二乙酯

英文别名:Cyanomethylphosphonic acid diethyl ester~Diethyl phosphonoacetonitrile; (Diethylphosphono)acetonitrile; Diethylphosphonoacetonitrile; Cyanomethyl phosphonic acid diethyl ester

CAS号:2537-48-6

分子式:C6H12NO3P

分子量:177.1381