更新日期: 2025-02-22

代谢工程方法改造大肠杆菌生产胸苷

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代谢工程方法改造大肠杆菌生产胸苷 4.7

胸苷是抗艾滋病药物司他夫定(3′-脱氧-2′,3′-双脱氢胸苷)和叠氮胸苷的重要前体物质。应用代谢工程方法对大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)生物合成胸苷进行了研究。通过敲除E.coli BL21嘧啶回补途径的deo A、tdk和udp三个基因,BS03工程菌株能够积累21.6 mg/L胸苷。为了增加合成胸苷前体物核糖-5-磷酸和NADPH的供给,进一步敲除pgi和pyr L使工程菌BS05胸苷的产量提高到90.5 mg/L。而通过过表达胸苷合成途径的ush A、thy A、dut、ndk、nrd A和nrd B六个基因,菌株BS08胸苷的产量能达到272 mg/L。通过分批补料发酵,BS08最终可以积累1 248.8 mg/L的胸苷。本研究结果表明经过代谢工程改造的E.coli BL21具有良好的胸苷合成能力和应用潜力。

代谢工程改造大肠杆菌合成β-丙氨酸

代谢工程改造大肠杆菌合成β-丙氨酸

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β-丙氨酸是天然存在的唯一一种β型氨基酸,在医药、食品、化工等领域有重要应用。该研究考察了以重组escherichiacoli发酵合成β-丙氨酸的可能性。在敲除副产物乙酸、甲酸、乙醇、琥珀酸、乳酸合成途径编码基因的escherichiacolicicimb0016-050(acka-ptapflbadhefrdaldha)菌株中,考察叠加敲除β-丙氨酸的竞争途径天冬氨酸激酶、泛酸合成酶和葡萄糖转运蛋白(eⅱcbglc)的编码基因(lysc、panc、ptsg)以及过表达来源于corynebacteriumglutamicum的pand基因对合成β-丙氨酸的影响。结果表明,叠加敲除上述基因后,β-丙氨酸的合成量依次提高了12.5%、39.3%和13.3%;过量表达pand基因,β-丙氨酸合成量提高了86.2倍;经发酵条件优化,菌株b0016-080bb/ppl-pand摇瓶发酵可合成(5.0±0.2)g/lβ-丙氨酸,体积生产强度达到(0.12±0.01)g/(l·h)。该结果为发酵法合成β-丙氨酸奠定了基础。

代谢工程改造大肠杆菌生产乳酸的研究进展

代谢工程改造大肠杆菌生产乳酸的研究进展

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乳酸是自然界中最小的手性分子,广泛应用于食品、医药和化工等领域,同时也是合成生物可降解塑料——聚乳酸的前体.目前,化学合成法和微生物发酵法是生产乳酸的两种主要方法,而后者在底物的可再生性、产物光学纯度和环境友好等方面均具有潜在优势.自然界中许多微生物细胞都能合成和积累乳酸,如大肠杆菌、酿酒酵母和乳酸菌等.与乳酸菌、芽胞乳杆菌和谷氨酸棒状杆菌等乳酸生产菌株相比,大肠杆菌具有生长速度快、营养要求简单、易于高密度发酵、代谢网络清楚、遗传操作方法成熟和产物乳酸光学纯度高等优势.本文中,笔者介绍了乳酸的研究现状及其在工业生产领域中的作用,系统综述了国内外通过代谢工程改造大肠杆菌生产乳酸的研究进展,在此基础上展望了乳酸生产研究的发展方向,以期为其工业应用提供参考.

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大肠杆菌多价工程疫苗对孕母猪免疫效力高

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大肠杆菌多价工程疫苗对孕母猪免疫效力高 4.5

大肠杆菌多价工程疫苗对孕母猪免疫效力高

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大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理 大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理 大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理

大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理

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大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理 4.5

介绍了大肠杆菌耐热肠毒素b(stb)的编码基因、理化性质、免疫学特征、分泌特征、毒性相关氨基酸残基、空间结构、膜受体以及stb致动物腹泻的机理。认为stb是一种十分重要的肠毒素,应进一步加强对stb及其致腹泻机理的研究。

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代谢工程改造大肠杆菌生产辅酶Q_(10)

代谢工程改造大肠杆菌生产辅酶Q_(10)

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代谢工程改造大肠杆菌生产辅酶Q_(10) 4.3

辅酶q10(coq10)是一种脂溶性抗氧化剂,具有提高人体免疫力、延缓衰老和增强人体活力等功能,广泛应用于制药行业和化妆品行业。微生物发酵法能可持续性生产辅酶q10,具有越来越多的商业价值。本研究首先将来自类球红细菌的十聚异戊二烯焦磷酸合成酶基因(dps)整合到大肠杆菌atcc8739染色体上,敲除内源的八聚异戊二烯焦磷酸合成酶基因(ispb),使内源的辅酶q8合成途径被辅酶q10合成途径取代,得到稳定生产辅酶q10的菌株gd-14,其辅酶q10产量达0.68mg/l,单位细胞含量达0.54mg/gdcw。随后用多个固定强度调控元件在染色体上对mep途径的关键基因dxs和idi基因以及ubica基因进行组合调控,将辅酶q10单位细胞含量提高2.46倍(从0.54到1.87mg/g)。进一步引入运动发酵单胞菌zymomonasmobilis的glf转运蛋白代替自身的磷酸烯醇式丙酮酸:碳水化合物磷酸转移酶系统(pts),使辅酶q10产量进一步提高16%。最后,对高产菌株gd-51进行分批补料发酵,辅酶q10产量达433mg/l,单位细胞含量达11.7mg/gdcw。这是目前为止文献报道的大肠杆菌产辅酶q10最高菌株。

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代谢工程改造大肠杆菌提高乙醇酸产率

代谢工程改造大肠杆菌提高乙醇酸产率

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代谢工程改造大肠杆菌提高乙醇酸产率 4.3

乙醇酸(glycolate)是一种在工业上有多种用途的重要化合物。本研究首先在大肠杆菌mg1655(de3)中敲除了ldha(乳酸脱氢酶),获得菌株mgly1,作为出发菌株。然后通过调节乙醇酸合成途径的关键酶——异柠檬酸裂解酶(acea)、乙醛酸还原酶(ycdw)、异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸化酶(acek)的表达水平,得到乙醇酸产率为0.24g/g葡萄糖(占理论产率的28.2%)。过量表达柠檬酸合成酶(glta),乙醇酸产率提高到0.326g/g葡萄糖(占理论产率的38.3%)。然后在mgly1中敲除了glcb和aceb(苹果酸合成酶),减少了乙醇酸合成的前体乙醛酸的消耗。最终获得的工程菌株mgly335乙醇酸产率达到0.522g/g葡萄糖(占理论产率的61.4%)。

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仔猪大肠杆菌ST_1—LT_B双价基因工程菌苗

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仔猪大肠杆菌ST_1—LT_B双价基因工程菌苗 4.5

辽宁省益康生物制品厂与解放军军需大学合作联合研制成功“仔猪大肠杆菌st_1—lt_b双价基因工程菌苗”。该苗是利用基因工程技术将大肠杆菌肠毒素st_1—lt_b分别克隆、测序后融合到一起插入质粒载体

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猪大肠杆菌K_(88)K_(99)双价基因工程苗对黄痢病的预防效果

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猪大肠杆菌K_(88)K_(99)双价基因工程苗对黄痢病的预防效果 4.4

近几年来,中赤乡乃至武平县各乡镇农户中仔猪黄痢病的发病率、死亡率均较高,尤其是农村中母猪舍简陋、卫生条件差的,黄痢病的发病率常达50%,死亡率高达30%。为寻求防治黄痢病的有效措施和办法,我站从1997年10月份起至1998年2月,应用哈兽研所生产的“猪大肠杆菌k8...

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预防幼畜大肠杆菌性腹泻双价基因工程菌苗的研究进展 预防幼畜大肠杆菌性腹泻双价基因工程菌苗的研究进展 预防幼畜大肠杆菌性腹泻双价基因工程菌苗的研究进展

预防幼畜大肠杆菌性腹泻双价基因工程菌苗的研究进展

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预防幼畜大肠杆菌性腹泻双价基因工程菌苗的研究进展 4.3

产肠毒素性大肠杆菌(etec)引起新生幼畜(仔猪、犊牛、羔羊等)腹泻在国内外都很普遍,是导致幼畜死亡的主要原因之一。etec具有两类致病因子:一种为肠毒素,即不耐热性肠毒素(lt)和耐热性肠毒素(st)。另一种为粘着素(定居因子),已知的粘着素抗原有k88、k99、987p、f41和f42等。etec借助这些粘着素定居于肠道粘膜的上皮细胞上,在那里大量繁殖,并产生大量肠毒素,导致幼畜发病。据国内统计资料表明,幼畜大肠杆菌性腹泻在腹泻中的比例,猪为35%,牛为26%,羊为17%,其死亡率在10~30%左右,流行面广,死亡率高,即便幸免于死的幼畜亦常生长滞缓,难以育肥,造成很大经济损失,对家畜饲养业危害甚大。加上近几年抗药菌株大量增加,致使治

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Au纳米标记物增强电化学免疫分析大肠杆菌的研究

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Au纳米标记物增强电化学免疫分析大肠杆菌的研究 4.7

通过在au纳米颗粒表面修饰辣根过氧化酶(hrp)标记的大肠杆菌抗体制备了一种新型的au纳米标记物,并将该纳米标记物应用于增强电化学免疫分析大肠杆菌.经过酶联免疫反应后,au纳米标记物、免疫磁性颗粒(imb)和大肠杆菌形成了imb/抗体-大肠杆菌-au纳米标记物的三明治式免疫复合物.以3,3',5,5'-四甲基联苯二胺(tmb)溶液作为底物,采用电化学与流动注射检测(fia)相结合的技术测定hrp的活性.检测到的电流大小与免疫复合物上hrp的量成正比,从而与大肠杆菌的浓度成正比.au纳米颗粒增加了hrp的负载量,增强了电化学信号,大大提高了大肠杆菌的检测灵敏度.实验结果表明,大肠杆菌浓度在1.0×102~5.0×104cfu·ml-1范围内与电流大小成线性相关,最低检测限达50cfu·ml-1,若对大肠杆菌样品溶液进行预浓缩,将得到更宽的检测范围和更低的检测限.本方法总的分析时间比其他方法短,在1h内就能完成对大肠杆菌样品的快速检测.

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羔羊大肠杆菌K_(99)F_(41)双价基因工程苗应用效果观察 4.6

羔羊是严重危害畜牧业生产的一种高发病。根据对新疆兵团十三个师(局)1995年的疫情调查统计,全兵团羔羊发病16.64万只,发病率14.80%;死亡9.11万只,死亡率8.10%,该病目前是危害养羊生产的重点疫病。为了探讨基因工程苗防治该病的可行性,我们进行了羔羊大肠杆...

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仔猪大肠杆菌基因工程ST1—LTB双价灭活疫苗应用效果观察

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仔猪大肠杆菌基因工程ST1—LTB双价灭活疫苗应用效果观察 4.4

采用由辽宁省益康生物制品厂提供的仔猪大肠杆菌基因工程st1—ltb双价灭活疫苗对临产前30天、体重相近的妊娠母猪143头进行了应用效果观察。结果表明,在临产前25天和15天分别颈部肌肉注射该

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代谢工程改造大肠杆菌对中碳脂肪酸生产的加强作用

代谢工程改造大肠杆菌对中碳脂肪酸生产的加强作用

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代谢工程改造大肠杆菌对中碳脂肪酸生产的加强作用 4.4

通过在大肠杆菌(escherichiacoli)中过量表达来自加州月桂(umbellulanacalifornia)的硫酯酶基因bte,极大地加强了大肠杆菌中碳脂肪酸(mcfas)的生产。并对mcfas在大肠杆菌胞内外的分布,以及是否对大肠杆菌细胞膜磷脂组成产生影响等进行了系统的分析。结果发现,产生的mcfas绝大部分存在于大肠杆菌细胞内,且未对其细胞膜磷脂组成产生明显影响。为了继续提高mcfas的产量,又进一步对大肠杆菌进行了代谢工程改造,通过结合表达乙酰-coa羧化酶(accase),优化硫酯酶的表达水平等,最终获得了188.9mg/l的总mcfas产量,并且产生的mcfas的比例高达85%以上,实现了mcfas的高特异性生产。

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大肠杆菌k_(88)k_(99)双价基因工程苗穴位免疫 4.4

中国农科院哈尔滨兽医研究所陈章水研究员等,应用基因工程技术研制成大肠杆菌k_(88)k_(99)双价基因工程苗。用该苗后海穴接种7头妊娠母猪,分娩后用强毒攻击53头仔猪,保护率为90.6%(48/53);皮下接种5头妊娠母猪,分娩后用强毒攻击47头仔猪,保护率为72.3%(34/47);从而证

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仔猪大肠杆菌K_(88)-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗的应用实验

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仔猪大肠杆菌K_(88)-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗的应用实验 4.7

对妊娠14~16周母猪颈部肌肉注射仔猪大肠杆菌k88-st1-ltb三价基因工程灭活疫苗(以下简称三价灭活苗)的结果表明:三价灭活苗可以大大降低仔猪大肠杆菌的发病率和死亡率,差异极显著(p<0.01);对仔猪生长安全、无副作用;三价灭活苗的使用效果明显优于仔猪大肠杆菌k88-k99双价基因工程灭活疫苗(以下简称双价灭活苗);疫苗现场应用免疫保护率明显高于双价灭活苗,差异极显著(p<0.01)。

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仔猪大肠杆菌K88ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活苗  Ⅳ.保存期试验和田间试验 4.7

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仔猪大肠杆菌K88_(ac)-ST_1-LT_B三价基因工程灭活苗  Ⅲ.实验室生产与检验 4.4

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苏云金芽胞杆菌对淀粉塑料膜降解的促进作用

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苏云金芽胞杆菌对淀粉塑料膜降解的促进作用 4.4

苏云金芽胞杆菌菌粉、玉米淀粉与线性低密度聚乙烯共混制得淀粉塑料,通过地埋降解和摇床快速降解试验研究了淀粉塑料中淀粉的降解率。结果发现地埋降解120d后含5%菌粉和50%淀粉的薄膜淀粉降解率达到89.52%,扫描电镜观察大部分淀粉颗粒破碎,出现许多小孔。不加菌粉的淀粉降解率只35.48%,表明添加的菌粉对淀粉降解有明显的促进作用

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不同浓度苏云金杆菌(Bt)室外防治春尺蠖试验初报 4.7

不同浓度bt粉剂药液防治春尺蠖不同龄期幼虫试验结果表明:200倍液浓度10d后防效达到了100%,是防治春尺蠖幼虫最理想的浓度。300倍液浓度防效更正减退率达到97%,根据各地地理条件、气候条件、虫口密度等,也可采用300倍液浓度进行防治。

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日本采用大肠杆菌制造最耐热生物塑料 日本采用大肠杆菌制造最耐热生物塑料 日本采用大肠杆菌制造最耐热生物塑料

日本采用大肠杆菌制造最耐热生物塑料

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日本采用大肠杆菌制造最耐热生物塑料 4.7

据报道,日本科学技术振兴机构等研究人员利用大肠杆菌,通过转基因操作和光反应等方法,制造出400℃左右高温下也不会变形的生物塑料。而此前生物塑料的最高耐热温度是305℃。

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日本研究者用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料 日本研究者用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料 日本研究者用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料

日本研究者用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料

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日本研究者用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料 4.6

日本研究人员日前宣布,他们利用大肠杆菌,通过转基因操作和光反应等方法,制作出400摄氏度左右高温下也不会变性的生物塑料,是当前同类塑料中最耐热的。日本科学技术振兴机构等机构联合发表的公报说,这种塑料是透明的,硬度特别高,用于汽车上代替玻璃,能大幅度减轻汽车重量,从而节约能源、减少二氧化碳排放。

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日本研究人员用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料 日本研究人员用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料 日本研究人员用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料

日本研究人员用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料

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日本研究人员用大肠杆菌“造”出最耐热生物塑料 4.4

日本研究人员日前宣布,他们利用大肠杆菌,通过转基因操作和光反应等方法,制作出400摄氏度左右高温下也不会变性的生物塑料,是当前同类塑料中最耐热的。日本科学技术振兴机构等机构联合发表的公报说,这种塑料是透明的,硬度特别高,用于汽车上代替玻璃,能大幅度减轻汽车重量,从而节约能源、减少二氧化碳排放。生物塑料用来自植物等的生物质为原材料生产,有利于保护环境。但此前的生物塑料硬度和耐热性都较差,所以用途有限,一般都是作为一次性材料使用。日本研究人员注意到,某些放线菌分泌的一种氨基

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预防犊牛大肠杆菌腹泻双价基因工程菌毛苗应用的研究

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预防犊牛大肠杆菌腹泻双价基因工程菌毛苗应用的研究 4.6

用大肠杆菌k99、f41基因工程菌毛苗对1500头怀孕母牛皮下注射菌毛苗5mg/头,局部和全身均无任何不良反应,未造成母牛流产、早产及犊牛畸形,无任何毒副作用。对菌毛苗主动免疫的怀孕母牛所产犊牛吃初乳后用强毒k99、f41大肠杆菌攻击,保护率达90%,证明该菌毛苗具有较强的k99和f41免疫原性,可使犊牛获得确实的被动免疫。在5个牛场对1480头犊牛进行菌毛苗免疫效果观察,未免疫对照组腹泻发病率为

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纳米复合材料标记物放大电化学免疫分析乳制品中的大肠杆菌

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纳米复合材料标记物放大电化学免疫分析乳制品中的大肠杆菌 4.4

将检测抗体(dab)和二茂铁甲酸(fca)固载于二氧化硅修饰的氧化锌(zno@sio2)表面制备纳米复合材料标记物({dab-zno-fca}),并将其用于放大电化学免疫分析乳制品中大肠杆菌(escherichiacoli)。采用"三明治"免疫分析模式,基于二茂铁甲酸产生的电流信号与大肠杆菌浓度之间的关系实现了对大肠杆菌的检测。结果表明,二茂铁甲酸产生的电流信号与大肠杆菌浓度的对数在2.0×102~2.0×106cfu/ml范围内保持良好的线性关系,检出限为100cfu/ml(s/n=3)。利用该电化学免疫分析方法对乳制品进行了大肠杆菌的加标回收试验,回收率在95.8%~105%之间。

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吴庭银

职位:造价预算工程师

擅长专业:土建 安装 装饰 市政 园林

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