用超声波辅助乙醇溶液浸提法和索氏提取法提取新疆地方植物药材紫穗槐中黄酮化合物并进行含量测定。以芦丁为对照品,NaNO2-Al(NO3)3-NaOH体系为显色剂,利用分光光度法在510nm处测定提取物中的总黄酮的含量。校准曲线为A=11.825C-0.0139,r=0.9992。超声提取法所得总黄酮的含量以芦丁计算为2.3562%,索氏提取法所得总黄酮的含量以芦丁计算为2.6375%,平均回收率分别为102.16%和96.53%。索氏提取法的提取优于超声波辅助乙醇浸提法,该法简单、准确,可用于新疆紫穗槐果实总黄酮的测定。
构建了两种能产生紫穗槐-4,11-二烯的酿酒酵母工程菌,其中附加体型工程菌W303-1B[pYeDP60/G/ADS]含有表达载体pYeDP60/G/ADS。整合体型工程菌W303-1B[rDNA:ADS]是将ADS基因的表达盒序列通过同源重组的方式整合到酿酒酵母W303-1B基因组中。GC-MS检测发酵产物,结果表明这两种工程菌均能产生紫穗槐-4,11-二烯,但附加体型工程菌产生的紫穗槐-4,11-二烯的产量要高于整合体型工程菌的产量。Southern杂交检测表明,ADS基因以单拷贝的形式整合到W303-1B基因组中,低于附加体型工程酵母中的ADS基因拷贝数。这些结果表明,ADS基因的拷贝数与酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的产量呈正相关。
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