本文建立了适合中国菊花种质资源长期保存的玻璃化超低温保存技术体系。在4℃下,把1~2mm的菊花茎尖放在含0.4mol/L蔗糖的MS培养基上暗培养2~3d,用预处理液在25℃下处理30min,再用玻璃化试剂PVS2在冰浴条件下处理15min,换新鲜的PVS2试剂并迅速投入液氮。液氮保存24h后,40℃水浴解冻2min,用含蔗糖1.2mol/L的MS液体培养基洗涤20min,滤纸吸干后接种到恢复培养基中,在25℃条件下弱光培养1~3d转入正常光照培养条件下培养,2周后成活率可达86%以上,成活的茎尖均可再生。
目的:建立同时测定野菊花中绿原酸、木犀草苷和蒙花苷3个主要活性成分含量的方法。方法:采用RP-HPLC法,选用Kromasil-C18(250mm×4.6mm,5μm,)色谱柱;以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相(梯度洗脱);流速为1.0mL.min-1;检测波长为334nm;柱温为30℃。结果:绿原酸、木犀苷和蒙花苷分别在40.44～647.04ng(r=0.9998)、19.50～311.92ng(r=0.9997)和253.62～4057.82ng(r=0.9999)范围内线性关系良好;平均回收率分别为100.96%、99.99%和98.94%,RSD均<2.0%。22批野菊花药材中绿原酸含量为0.108%～0.545%,木犀苷含量为0.029%～0.393%,蒙花苷含量为0.028%～3.518%。结论:本方法简便准确、稳定可靠,可以用于野菊花药材的含量测定。
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