在纽约市公共卫生研究所(PHRI)的努力下,以枯草芽孢杆菌进行蛋白生产又向商业化前进一步。该项目得到 Applied Microbiology(AMBI)(Brooklyn,NY)的资助。新的载体除带有分泌序列与外源基因外,还带有特殊的蛋白标志基因。利用此基因,研究者可通过追踪分泌产物的产量检测生产某一蛋白的可行性。初步研究之后,可用限制性内切酶除去蛋白标志基因,从而得到纯的分泌产物。
以蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)为试验材料,比较细菌基因组DNA的提取方法。将ERIC-PCR应用于醋液分离菌的研究,对此反应体系的主要因素进行优化,最终建立了适合于此菌种的ERIC-PCR体系。采用改良的传统细菌基因组DNA提取方法,所提取的DNA质量较高,能够满足ERIC-PCR反应的需要。反应体系:25μL反应体积10×扩增缓冲液(含Mg2+)2.5μL,20pmol/μL ERIC-PCR引物E11μL,20pmol/μL ERIC-PCR引物E21μL,DNA模板2μL,2.5mmol/LdNTPs混合液2.0μL,taq聚合酶1.1μL,双蒸水补齐;PCR反应程序为:94℃变性3min,1个循环;94℃变性30s,55℃退火40s,72℃延伸1min,30个循环;72℃延伸4min。
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