本文建立了适合中国菊花种质资源长期保存的玻璃化超低温保存技术体系。在4℃下,把1~2mm的菊花茎尖放在含0.4mol/L蔗糖的MS培养基上暗培养2~3d,用预处理液在25℃下处理30min,再用玻璃化试剂PVS2在冰浴条件下处理15min,换新鲜的PVS2试剂并迅速投入液氮。液氮保存24h后,40℃水浴解冻2min,用含蔗糖1.2mol/L的MS液体培养基洗涤20min,滤纸吸干后接种到恢复培养基中,在25℃条件下弱光培养1~3d转入正常光照培养条件下培养,2周后成活率可达86%以上,成活的茎尖均可再生。
以菊花组培苗为试材,对菊花玻璃化苗和正常苗的生理特性进行比较。测定了组织含水量、叶绿素、可溶性糖、蔗糖、可溶性蛋白5个指标。玻璃化苗的组织含水量、可溶性糖含量高于正常苗,叶绿素a、叶绿素b、蔗糖、可溶性蛋白含量明显低于正常苗。说明玻璃化苗与正常苗在光合能力、蛋白质合成和糖代谢方面显著不同。
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