应用PCR扩增GRG受体基因第二外显子的实验条件研究
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为了研究PCR扩增的最适条件,以GRG受体第二外显子基因为对象,观察了影响PCR反应的因素.研究结果表明:最佳变性温度为92℃与94℃;最适的退火温度为58℃;最适的引物浓度为0.6,0.8μmol;以1.0U酶量结果最满意,最适dNTP浓度为100~150μmol/L,最适的镁离子浓度为2.0mmol/L;最佳循环次数为35个循环;该文可为希望引入PCR作为诊断实验的实验室提供有用的信息.
应用3’RACE技术扩增仿刺参C型凝集素基因及实验条件的优化
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从GenBank上调取刺参C型凝集素(C-type Lectin)基因序列EST,根据此序列设计RACE引物,采用PCR扩增技术得到了仿刺参C-type Lectin基因序列(EST),根据这段EST序列设计1个基因特异引物(GSPF),与通用引物(UPM)扩增,成功地克隆到了该基因的3’末端序列.同时,对仿刺参C型凝集素基因3’克隆的实验条件进行了优化.该扩增片段长度为670bp,与已知序列重叠部分为417bp.经测序和比对发现该段序列与预期的目标基因的序列一致.
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