筛选获得草珊瑚与金粟兰鉴别的特异位点并建立双位点特异性PCR方法,用于鉴别草珊瑚与金粟兰叶片以及两者的混杂品。采集不同产地的草珊瑚18份、金粟兰6份,所有样品提取总DNA,并对草珊瑚与金粟兰干燥叶片进行DNA提取。通过对其ITS片段进行扩增、测序,并搜索GenBank数据库中收录的草珊瑚与金粟兰的ITS序列,进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物,构建多重PCR体系,并优化PCR条件,对草珊瑚与金粟兰叶片进行快速分子鉴定。构建了多重PCR鉴别体系,只经一个PCR反应,能扩增出草珊瑚580 bp的特异性鉴别条带及金粟兰470 bp的特异性片段,可快速鉴别草珊瑚与金粟兰叶片,并可判断相互是否混杂。使用双位点特异性PCR技术可以有效快速鉴别草珊瑚与金粟兰叶片,并可判断相互是否混杂。
目的:建立杜仲茶中桃叶珊瑚甙含量测定的超高压提取(UHPE)-高效液相色谱(HPLC)分析法。方法:采用正交试验考察超高压提取压力、提取时间、料液比和甲醇浓度对提取桃叶珊瑚甙的影响,以HPLC法为含量测定方法。结果:最佳提取桃叶珊瑚甙的条件为超高压提取压力350 MPa、时间3 min、料液比1:8、70%甲醇。HPLC法测定桃叶珊瑚甙的线性范围在5~100μg/ml,相关系数为0.9998。杜仲茶中桃叶珊瑚甙的含量为1.94%,相对标准偏差为3.02%,加标回收率为97.40%~100.16%。结论:此法简单、快速、经济,是测定杜仲茶中桃叶珊瑚甙含量的有效方法。
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